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如何观察转基因植物的GFP发光检测方法?

作者:admina来源:时间:2020-12-10 16:07:51浏览量:2202人阅读

  

如何观察转基因植物的GFP发光检测方法?


转基因植物的GFP发光检测能用手持式双波段荧光蛋白激发灯、手电筒式荧光蛋白激发灯、体视显微镜用荧光蛋白激发灯等多种光源可以激发,荧光蛋白的激发波长通常在450-480nm,发射波长在520-550nm,增强型荧光蛋白的激发波长在485nm,荧光蛋白激发灯能够满足绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白激发观察。

转基因植物的GFP发光检测能用什么灯直接观察么?


什么是GFP? 在生物学研究中有何用途?
GFP是绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein, GFP),简称GFP,20世纪60年代在水母中发现的发光蛋白。由238氨基酸组成的单链多肽,在蓝光或紫外光激发下发出绿色荧光,可以起到标记目的基因的作用。


GFP主要使用什么颜色的激发光?你观察到得荧光是什么颜色?

GFP在蓝光或紫外光激发下发出绿色荧光。绿色荧光蛋白基因是目前应用的报告基因之一,检测方便,只需激发光源,不需任何底物或辅助因子;材料可活体观测,无需预处理;植物本身无绿色荧光,不会有假阳性。因此,它目前在动物、植物、微生物的研究中已得到广泛的应用。

植物病毒表达载体(GFP或eGFP,RFP),农杆菌侵染植株后,如果要观察GFP发光,需要选用激发光源来照射植物,同时需要佩戴专用的荧光观察眼镜,即可观察到明亮的GFP荧光。的双波段光源能够激发GFP,eGFP和RFP,无论是绿色荧光蛋白还是增强型绿色荧光蛋白以及红色荧光蛋白,均能够激发出明亮的荧光,如果需要拍照,需要选用专用遮光片才可以拍到荧光。

 

GFP作为一种新型的基因报告分子,可用于活体、原位、即时的检测基因表达及蛋白定位。不象其他生物 发光基因报告分子需要附加蛋白或底物、辅物、辅因子等才会发光。GFP非常稳定,不依赖于物种,对活细胞没有伤害性。由于这种载体在转染细胞后很快就能通过观察荧光细胞而检测出基因的表达情况,因而,为基因转染研究中确定转染效率。在转基因作物的基因表达研究中,GFP(绿色荧光蛋白)可作为非常重要的衡量工具。通过定点观察GFP,可有利于学习如何操纵和提高有用的染色体特性,从而可以筛选出高基因表达的植物。可提高农作物产量、质量,并不断适应人们对粮食的更高需求。

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